Developing rapid and low-cost method for detection of rifampicin resistance mutations in the core region of the rpoB gene encoding of b-subunit of Mycobacterium tuberculosis RNA-polymerase. The method is based on post-PCR melting curves analysis of PCR product amplified from wild type and tested DNA mix. All of the 14 rifampicin resistant isolates and all 3 susceptible isolates were correctly identified by our method providing 100 % sensitivity and specificity. Total time for analysis performance did not exceed of 5 and half hours.
Разработан быстрый и недорогой метод детекции мутаций в «коровом» регионе гена rpoB, кодирующем β-субъединицу РНК-полимеразы Mycobacterium tuberculosis, вызывающих устойчивость к антитуберкулезному препарату рифампицину. Метод основан на пост-ПЦР анализе кривых плавления с высоким разрешением амплифицированных фрагментов ДНК с использованием коамплификации тестируемой ДНК и ДНК дикого типа. При анализе ДНК из рифампицин-чувствительных и устойчивых изолятов, несущих тестируемую мутацию, метод показал 100 % чувствительность и специфичность. Суммарное время проведения анализа, начиная с выделения ДНК из биологического образца (бактериальные клетки или мокрота), не превышает 5,5 ч.
